UCAR-T与K562细胞共培养策略对其体外扩增、表型稳定性及肿瘤杀伤活性的影响研究

陈 超南
上海复赛瑞真生物技术有限公司

摘要


针对通用型UCAR-T细胞临床转化中体外扩增倍数低、功能耗竭明显、临床输注剂量不足的核心痛点，验证“UCAR-T与K562细胞共培养”的体外扩增策略，明确该策略对UCAR-T扩增能力、表型稳定性及肿瘤杀伤活性的影响，为优化CAR-T体外制备工艺、提升其临床治疗潜力提供实验依据。本研究以UCAR-T细胞及基因修饰K562细胞为研究对象，经复苏、分选激活、慢病毒转导、基因编辑后，按1：2比例与K562细胞共培养。通过细胞计数、流式细胞术及体外杀伤实验，系统检测UCAR-T的扩增倍数、T细胞表型亚群及肿瘤杀伤活性，对比共培养与单独培养组的差异。结果显示，UCAR-T从Day1共培养至Day12，扩增倍数达77.76倍，高于单独培养组7.33倍；24h杀伤实验显示，共培养组对Raji细胞的杀伤活性呈浓度依赖性（效靶比10:1时杀伤率约90%，0.625:1时约30%），且显著优于单独培养组。表型分析显示亚群检测中，共培养组CD8+T细胞内中央记忆T细胞（TCM）占比70.94%、效应T细胞（TEFF）占比1.60%，而单独培养组TCM为9.62%、TEFF为36.73%。结果表明，UCAR-T与K562细胞共培养策略可有效提升体外扩增能力、增强肿瘤杀伤活性，并诱导记忆性T细胞亚群分化以减少效应T细胞维持表型稳定性，为优化CAR-T体外制备工艺、突破临床转化瓶颈提供了重要实验支撑。

关键词


UCAR-T；K562细胞；共培养；体外扩增；表型稳定性；肿瘤杀伤活性

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